产生可靠HPLC结果的重要建议

高效液相色谱在分析研究和质量控制实验室中有着显著的存在。有关生产过程和公布研究成果的重要决策都是基于只有在HPLC系统生成的数据具有高度可靠性的情况下才能做出的决策。

HPLC是一个多组分系统，因此结果的准确性和可靠性取决于每个组分的性能水平。本文提出了一些建议，有助于提高结果的真实性。为简单起见，在单独的标题下讨论了每个组成部分的贡献。

流动相

流动相的主要作用是将注入的样品携带到柱中，在柱中分离后将单个组分转移到检测器进行识别和定量。理想情况下，在开始分析前应重新准备流动相高效液相色谱法应使用级溶剂。溶剂应不含任何悬浮颗粒。首先在真空条件下用0.45 μ过滤器过滤溶剂。建议进一步使用在线过滤器去除残留的悬浮颗粒。流动相溶剂之间应充分混溶，注入样品也应混溶。当使用缓冲液作为流动相组分时，绝对不要让缓冲液在系统内部干燥，因为在干燥过程中形成的盐会沉积，并对流动相的自由流动造成阻碍，此外还会损坏泵组件。

样本

像流动相溶剂一样，在注射前过滤样品是一个很好的做法。大体积注射将导致峰值形状扭曲，因此柱不应超载，使大体积注射。每当要开发一种新方法时，都建议检查样品与流动相的兼容性。如果溶解度低，尝试一种溶剂或与流动相混合物极性相匹配的溶剂组合。

列

色谱柱是高效液相色谱系统的关键组成部分。它的正确护理和使用将对提供高可靠性的结果大有帮助。

操作流量和压力应逐渐改变，以使这些变化不干扰固定相填料。保护柱的使用也可以防止杂质进入主柱。由于流动相的流量取决于温度，强烈建议使用柱烤箱，以保持恒定的柱温，以保持流量的一致性。

泵

泵需要提供流动相的一致性，并在整个分析运行中保持溶剂组成。在进行梯度分析时，根据软件程序，需要泵来维持流动相的组成。实现这些条件的方法是防止泵组件的损坏，并在发现任何可见的损坏时及时更换这些组件。根据情况，通过允许冲洗中间极性溶剂或纯水逐渐冲洗泵。

注射器/ autosampler

注射量的一致性是结果可重复性的首要要求。手动注射器包括固定体积的样品回路，在自动模式下，注射器保持体积的一致性，无需操作员干预。

需要特别注意防止以前分析的污染。如果是手动进样器，一定要用足够的样品冲洗进样回路，如果是自动化系统，要确保中间洗涤循环是分析程序的一部分。在分析开始之前，对样品和标准可重复使用小瓶的洁净度进行验证是至关重要的。

光源

大部分HPLC分析可以使用UV光源进行。这样的光源有一定的使用寿命。根据供应商的建议更换灯具将有助于提高吸光度值的重现性。

探测器

检测器是HPLC系统的最终部分，它确认不同的样品组分的存在，并帮助他们的定量。

建议检测器不定期脱机清洗，并在重新使用前用水和流动相冲洗。操作压力范围不能超过，以防止可能损坏探测器细胞壁。

文章中提出的建议肯定会提高结果的质量，但毫无疑问，没有什么可以替代系统对参比化合物的定期校准。