液相色谱流动相溶剂离线混合的注意事项
你会遇到一个非常罕见的人高效液相色谱法在整个运行过程中使用单一溶剂的方法。保存在流动相储层中的纯溶剂需要在等容条件下按要求的比例混合。
溶剂混合是作为程序偏差可以影响色谱图和分析的关键步骤。
溶剂的混溶性
溶剂的混溶性与它们的极性直接相关。记住“物以类聚”。要混合的溶剂应在所有比例下相互混溶，因为不混溶或部分混溶的溶剂不能用于HPLC分析。常用的溶剂如水、甲醇、乙腈、四氢呋喃等彼此完全混溶，常用于反相分离。
温度效应
溶剂的密度随温度的变化而变化，进而影响分配的体积。为保证良好的重现性，溶剂瓶在混合前应在实验室室内保存一段时间，以稳定到实验室温度。
溶剂很少按化学计量进行混合，而且混合时所占体积小于混合前各自体积之和。此外，由于混合，温度会发生变化，从而导致体积的变化。甲醇与水混合会导致加热，而乙腈和水混合会导致冷却。为了补偿在相同的混合顺序上的热变化，每次都应遵循相同的混合顺序。最好是分别测量所需的体积并将它们混合，而不是将一种溶剂的体积放入量筒或容量瓶中，然后将另一种溶剂的体积补到刻度处。
纯度
应使用HPLC级溶剂。该等级可从Ar级溶剂的蒸馏商业制备，然后过滤。水应具有高纯度，并且可以使用基于逆转渗透的市售系统获得。参见高效液相色谱法用水要求的链接。
紫外截止波长
UV截止波长是在使用UV检测器时决定可以混合的HPLC溶剂的重要考虑因素。UV截止指定UV检测器可用于特定溶剂的最低波长。这里提供了一些普通溶剂的截止值：
| 溶剂 | 紫外线切断(nm) |
| 甲醇 | 205. |
| 水 | 190 |
| 乙腈 | 190 |
| 四氢呋喃 | 212. |
| 己烷 | 195 |
折射率
在使用RI探测器时，应在混合溶剂之前考虑溶剂的折射率。样品的折射率应尽可能不同地从流动相的折射率进行显着反应
粘度
溶剂应具有低粘度，以有效地流动和传质分析物进出固定相孔。粘稠的溶剂也会导致高柱背压。
压缩系数
有些溶剂比其他溶剂更容易压缩。高效液相色谱在高压下工作，由于溶剂的可压缩性，流量会产生偏差。现代泵送系统正确的溶剂可压缩性，并确保一致的流量。
有害的溶剂
使用安全应该是你最关心的问题。尽量避免使用有毒、易燃或致癌的溶剂。
在本文中，涵盖了手动混合移动阶段的注意事项。随后的物品将介绍使用低压混合选项在系统中的移动阶段混合。
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上一篇关于脱机混合溶剂的文章已经讨论过了。进一步混合以获得所需的流动相组成发生在高效液相色谱中[…]
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