缓冲液在反相高效液相色谱分离中的作用
极性和可电离化合物的反相分离需要精确控制pH值使用缓冲区。这确保了可重复的保留时间和自由从尾峰保留时间和自由从尾峰。缓冲还可以防止分析物与固定相上残留的硅烷醇之间的相互作用。
反相分离可以方便地在pH范围2.0 - 7.5进行。然而，如果pH保持在缓冲离子的pka值的+/- 1 pH单位内，结果的再现性是实现的。为方便参考，这里列出了常用的泡芙的有用范围:
| 缓冲 | pka 250C | pH值范围 |
| 磷酸 | 2．1 | 1.1 - -3.1 |
| 7．2 | 6.2 - 8.2 | |
| 12．3 | 11.3 - 13.3 | |
| 醋酸 | 4．8 | 3.8 - -5.8 |
| 硼酸 | 9．2 | 8.2 - -10.2 |
| 三乙胺 | 10．8 | 9.8 - -11.8 |
决定缓冲选择的因素
紫外截止值
缓冲液的选择应基于检测波长的透明度。缓冲液的紫外截止波长一般在230 nm到200 nm以下。
流动相相容性
缓冲器应与流动相兼容。这些不应该沉淀，因为沉淀的形成会对泵和色谱柱造成不可弥补的损害。
用LC - MS系统选择缓冲液
对于LC - MS应用，缓冲区的选择是有限的，因为缓冲区应该有高波动性。磷酸盐缓冲液不适合这种用途。常用的是铵盐，如醋酸铵pH 2.0 - 3.8，甲酸铵pH 2.7 - 3.7和碳酸铵pH 6.6 - 8.6。
缓冲液浓度
增加缓冲液的浓度可以加速极性分子的洗脱。这可以用来解决共洗脱峰，但更高的浓度增加粘度导致高柱背压。
硅基色谱柱易于溶解，甚至低于pH 7.0，当与高浓度有机溶剂混合时，溶解度成为一个问题。浓度低于0.005M通常使缓冲剂失效。浓度范围10到50毫米通常是足够的大多数应用。一般来说，有机溶剂的用量不应超过50%。
推荐的缓冲液制备顺序
- 将药粉溶解，按要求补齐。
- 在与有机介质混合前应调整pH值
- 通过0.45 μm过滤器进行分析高效液相色谱法UHPLC应用为0.22μm
使用缓冲液时的必要预防措施
- 缓冲液是微生物生长的良好介质。尽可能准备新鲜的溶液，并设置较短的有效期。
- 使用缓冲液后冲洗系统用相同比例的水-有机溶剂混合物，然后是纯水，然后是储存溶剂。如果系统长时间不使用，为了防止缓冲盐沉积在泵组件和柱内，这是必要的
现在您已经理解了反向相分离中缓冲区控制的重要性，请对本文的内容留下您的问题和评论。
亲爱的迪帕克·巴诺特博士:
我写信给你是为了了解你的世界支持计划的一些细节。
我需要一些用HPLC - uv检测法测定抗生素(大环内酯)的资料。
我能请你给我带路吗?
我期待着你的消息。
你忠实的
亲爱的Nafise,
利用紫外-可见二极管阵列检测器在不同波长同时测定不同食品中的大环内酯类化合物。根据您的要求和应用，您必须参考一些色谱杂志来开发自己的测试条件。
问候
先生,
如何从缓冲液(三乙醇胺)中分离分离物?缓冲液是从HPLC中回收的粘性液体
我的建议是使用其他一些缓冲介质，因为粘性介质会缩短柱的使用寿命。缓冲介质应该自由流动。
它非常有用。请继续写下去。