如何在高效液相色谱分析前去蛋白生物液体?

去蛋白化的作用范围不断扩大高效液相色谱法生物体液分析。HPLC分析前样品过滤。样品过滤在液相色谱分析中的重要性强烈建议延长柱寿命和降低维护成本，从而有助于提高实验室吞吐量。

除过滤外，还需要去蛋白，以分析生物液体，如血浆、血清、尿液和脑脊液中抗生素、残留农药和精神药物的水平。蛋白质需要沉淀并从样品中除去，否则会导致色谱柱性能的恶化

除蛋白技术

变性-加热变性大多数蛋白质和加热变性颗粒被离心和除去。

化学沉淀-比加热更有效，因为温度敏感的化合物在加热过程中会恶化。用三氯乙酸酸化，离心，氢氧化钠中和，可以去除99%的蛋白质。也可以使用过氯乙酸。这两种酸都有一些缺点。三氯乙酸在230nm以下吸收强烈，而过氯乙酸在溶液中留下盐，可与有机溶剂沉淀或造成紫外线探测器的基线噪音

乙腈的治疗-乙腈是一种常见的溶剂，在190nm以下透明。将血浆样品与乙腈混合和离心，沉淀约95%的蛋白质。非极性蛋白质，如白蛋白，仍然处于液相。如果使用保护柱除去剩余的5%的蛋白质，可以直接注射上清。长期使用时，保护柱需要更换或倒转冲洗，以防止蛋白质进入主柱。

在线除蛋白

一般情况下，加入酸或有机溶剂后，脱机进行离心脱蛋白即可。然而，为了节省时间，自动化在线去蛋白是可取的。几家仪器供应商提供专用配件，主要包括前处理柱:填充亲水聚合物涂层。大分子蛋白被保留，而分析物被引导到主柱。

我们已经看到，去蛋白已经扩展了HPLC分离生物流体的应用，这些流体是复杂的基质，如果没有使用该技术，对这些流体的HPLC估计将是困难的，如果不是不可能的话。

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