如何克服紫外-可见光谱研究中的干扰?

理想情况下，含有单一分析物的溶液的吸光度光谱应该是在最大吸光度波长处的单一吸收带。然而，在实际样品中，光谱受到其他干扰物种的影响。通过采用本文中介绍的不同方法，可以很容易地消除这种干扰。

紫外-可见光谱学中的干扰是由多种物理或化学因素引起的。化学干扰是由于任何一种或一组化合物的存在而产生的，这些化合物在初级吸收分子的附近吸收。另一方面，样品中悬浮的固体杂质会产生物理干扰，从而引起散射。

物理干扰

光的散射是由于吸收溶液中悬浮的杂质的存在引起的。它导致背景吸光度，从而降低感兴趣的分析物的吸光度。在进行吸光度测量之前对样品进行过滤或离心似乎是明显的解决方案，但当只有μl大小的样品可用时，这不是一个实际的方法。通过减小样品和检测器之间的间隙，可以减少散射引起的吸光度损失。

化学干扰

化学干扰可由吸收溶液中单个或一组吸收体的存在而引起。

Isoabsorbance测量

如果干扰化合物具有已知的吸光度特征，那么它对主要分析物的干扰可以通过选择一个波长消除，其中干扰化合物显示了一些吸光度，就像它在分析波长那样。从分析波长的吸光度减去这个波长的吸光度，剩余的吸光度就是被分析物的正确吸光度。这种方法是实用的，如果只有一个单一的干扰存在，如果它的最大吸收波长远离分析物的吸收波长。

多组分干扰

当存在不止一种干扰物且与主要分析物的光谱有相当多的光谱重叠时，多组分分析适用。从测量的吸光度中减去纯干涉物的吸光度，从而得到感兴趣的被分析物的真实吸光度。

三个点校正

在这种方法中，在接近解析波长的地方选择两个波长，但在解析波长的两边。利用线性插值可以准确地估计背景干扰。该方法特别适用于复杂样本矩阵产生的非线性背景吸光度。

导数光谱

到目前为止，背景和噪声校正最方便的方法是导数光谱法。一阶导数的拐点对应于最大吸光度的波长，二阶导数出现在负形峰的尖端。这有助于区分非常密集的或重叠的吸收峰。一阶导数进一步消除了基线偏移，如果有的话，这有助于提高定量分析的准确性。除了基线偏移，导数光谱学还有助于克服来自其他未知干扰化合物的散射效应。