分析方法验证

这analytical results you communicate can have far-reaching consequences and can form the basis for taking decision on safety of use of commercial products, foods and natural resources in addition to decisions involving legal matters.

As a responsible analyst before you undertake analysis in the laboratory you should make sure that your results are authentic and are universally acceptable. This key objective can be realized only if the method selected for the purpose is duly validated.

Analytical method validation建立有记录的证据，即测试采用的程序适合于质量，可靠性和结果一致性的预期目的。

What Is Analytical Method Validation?

Analytical method validation建立有记录的证据，即测试采用的程序适合于质量，可靠性和结果一致性的预期目的。

换句话说，如果在世界各地的任何其他实验室中都采用了相同的方法，在相同的条件和控制参数下，结果应一致。

每种方法都需要验证：

• 在常规使用之前
• 当更改分析条件（例如技术变化）时，所需浓度范围或样品矩阵的变化
• 每当对现有过程进行更改

在计划验证程序之前，收集有关分析要求的相关信息很重要

• 要检测到的组件
• 预期浓度水平
• Required level of detection and quantification
• Nature of sample matrix
• 使用的分析技术类型
• 所需程度的精度和准确性

方法验证的参数

Before undertaking themethod validation procedure，应使用参考标准来确定分析测量的响应是由于感兴趣的分析物而不是由于任何其他化学物质而引起的。

建立此功能后，您可以继续进行评估以下特定特定功能的验证。这是各种method validation parameters。

• 选择性和特异性
• 线性
• 范围
• 准确性
• 精确
• 定量限制
• 坚固
• 坚固

我们将讨论每个分析方法验证参数详细说明您可以更好地理解分析方法验证。

选择性和特异性

选择性和特异性are often used synonymously but these are different terms. Specificity is the unequivocal response of the technique to a specific analyte present in the sample whereas selectivity can be applicable to a collective response to a group of analytes having similar chemical and physical characteristics.

所选方法应符合在有意添加的干扰物存在下可以预期在所研究样本中可以预期的选择性和灵敏度的标准。

选择性更常用于分析技术，很少仅特定于一种分析物。此外，选择性不应受到干扰物种（例如降解产物，杂质和其他基质成分）的影响。

线性

线性性是指分析程序产生与所需浓度水平内样品中分析物浓度范围直接成比例的结果的能力。

• 线性应使用至少6个标准的线性确定，其浓度从预期浓度水平的80％到120％。
• 线性报告应包括线的斜率，线性范围和相关系数数据。相关系数r在工作范围内应大于或等于0.99

范围

从校准图推导工作范围。它是落入线性范围内的分析物的上和下浓度之间的间隔。与该范围相对应的结果表明，精度，准确性和线性性的可接受水平。

准确性

• 确定分析物值的程度与真实值相对应。
• 准确性在预期浓度范围内会有所不同。
• 应在80％ - 120％的预期范围内使用工作或参考标准确定它
• 准确性is determined by :

1. Analyzing a sample of known concentration and comparing with the true value
2. 峰值空白（除了分析物以外的所有组件）并与预期结果进行比较。
3. Standard addition method in which the sample concentration is determined. A known amount of analyte is added and the concentration is once again determined. The difference of the two concentration values is compared with the actual value of added analyte.

• 准确性is also defined by the comparison of test results with those obtained using another validated test procedure

精确

• 精确表达在相同条件下同一样品的一系列测量
• 高度的精度不一定意味着高度准确性
• 精度表示为方差，标准偏差或一系列测量的变化系数
• 至少应进行五个重复样品测定

Limit of Detection

• 可以检测但不一定量化的分析物的最低量
• 产生与分析物相对应的峰值响应的校准标准的最低浓度应至少测量6至10次。需要平均响应（X）和标准偏差（SD）来计算检测极限

检测极限= X + (3SD)

• Signal to noise ratio at limit of detection should be at least 3:1

定量极限

• 在规定的实验条件下，可以用定义的精度定量确定的分析物的最低量
• 对于平均响应和标准偏差，应进行6 - 10个观察结果

定量限制= x +（10SD）

• Signal to noise ratio should be at least 10:1 at the limit of quantitation

坚固

坚固性测量测试结果在以下条件下的可重复性：

• 不同实验室在相同条件下为同一样品生成的结果
• 不同分析师在相同条件下为样品生成的结果
• 使用不同仪器的相同分析
• 在不同的环境条件下相同的分析
• 使用来自不同来源的测试材料相同的分析

坚固

鲁棒性检查操作参数的影响对分析结果的变化

• ph
• 温度
• 色谱分析中的流量，注入量，检测波长或流动相组成等操作条件

变化应是故意的，但在现实范围内，以研究该方法的鲁棒性。进行故意更改后的分析结果应属于该方法指定的公差限制。

方法验证似乎是一项乏味且耗时的活动，但是一旦该方法在采用前验证了该方法，在任何情况下都不会让您失望。

分析方法验证的需求是什么？

在计划对实验室中的样本进行分析之前，您应该了解样本的基本细节，例如其同质性，物理状态，可用数量和稳定性。

也必须了解分析要求，例如：

• 要检测和量化的组件
• 预期浓度水平
• 样品矩阵的性质。换句话说，可能存在的干扰性质可能使确定所需组件的确定复杂化
• 所需程度的准确性和精确度
• Appropriate analytical technique for the analysis
• 分析所需的材料和设备
• Availability of required resources
• 分析成本

这above considerations require a judicious selection of the method. Let us see what could be those useful reference sources that you can access. You can consider yourself fortunate if your laboratory has already a validated method available which can be adopted without applying a second thought. However, this may not be the case every time, and you would feel the need to search for a suitable method due to the following constraints:

• 这sample matrix is different from routine samples and requires a different set of extraction procedures or can introduce different interferences
• Non-availability of required reagents or glassware
• 非功能或未校准的仪器

在这种情况下，您将不得不寻找其他替代方法，因此您必须通过可用选项搜索该方法，例如：

• 标准教科书
• 参考分析期刊
• Pub Med
• 谷歌搜索

您搜索的次数越多，您可能会更加困惑。让我们假设在浏览参考后，您对特定方法进行了归零。

现在是验证该方法在常规使用之前验证该方法的重要阶段。您必须牢记这样一个事实，即您报告的分析结果可能会对使用的安全性，毒品的功效，对环境样本的有毒限制或对法律事项的裁决产生深远的后果。

作为负责任的分析师，您必须确保您报告的数据是可靠的，并且将被普遍接受。只有通过遵循严格的验证过程才能实现此类目标。

验证是必要的：

• Before adopting the method in routine use
• 每当需要分析不同样品矩阵中的组件时
• 样本分析需要不同的分析程序

As a regular practice, any method needs to be validated before adoption. However, it would need to be revalidated under the following situations:

• 在既定程序中进行的任何更改
• 任何新配件都添加到现有系统中
• 该系统经历了已纠正的重大操作问题。

Why Is It Essential to Adopt Validated Analysis Methods?

分析化学是一门科学，可指导您如何从样本中获取所需信息。这方法验证指南提供的

• 选择适当的技术
• 遵循的程序
• 数据分析和解释
• Environmental controls and other precautions to be adopted

你可以考虑自己幸运的如果一个验证hod meeting your analysis requirements is already available in your laboratory. Alternately, you will have to identify the appropriate method through a literature search.

Your literature search will be successful if you have clarity on your analysis objectives. The search can be initiated using Internet search engines or referring to documented sources such as research journals. The next step is to validate the method before adopting it.

方法验证的好处

方法验证是一种可以证明在许多情况下有益的做法：

• 在国际职业会议上的国际声誉或演讲期刊上发布您的发现
• 对自己以及使用您的结果的人灌输一定程度的自尊和信心
• 接受认证机构和外部审核员对程序和结果的接受
• 就消费者安全使用产品的使用方面做出有关使用数据的关键决定
• 免于与其他实验室未进行测试结果的争议

Critical Role of Method Validation in Chemical Analysis

每个分析都需要选择一种方法，以帮助您实现所需的目标。如果有一种已建立的方法，您应该认为自己很幸运，因为这将为您节省采用该方法之前验证该方法所需的精力和时间。

您可以选择多种选择，以选择适合您的分析要求的方法。这些选项包括对标准分析教科书，研究期刊出版物，Google Search等的调查。

You will come across several methods in your Google search but this can add to further confusion as the method selected may not be suitable for your analysis requirements.

In making your method choice, you also have to keep into consideration other factors such as:

• 分析成本
• 所需试剂和标准的可用性
• 所需工具设施的可用性
• 训练有素的人力的可用性
• 分析时间要求
• Simplicity of method

必须记住，最简单的方法可能不是理想的方法，因此您必须仔细评估选择的选择，以查看上面列出的注意事项。

现在，您已经介绍了分析方法验证，请随时在下面的评论中提出任何问题。